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Illumina HiSeqTM 2000高通量測序平臺

Hiseq 2000測序通量可達600Gb/run,一次運行可獨立測試16個樣品(或混合樣本),是Illumina公司2010年推出的一款新的高通量測序儀。憑借Illumina久經考驗且廣泛采用的可逆終止法邊合成邊測序試劑,再加上創新的制造工藝,HiSeq 2000實現了行業最高的測序產量和最快的數據產生速率。

HiSeq 2000的測序原理和Genome Analyzer相同,采用穩定的可逆終止法邊合成邊測序技術。該技術使用4種含有末端阻斷基團和不同熒光信號的堿基進行模板互補鏈的合成,不僅確保了測序的高精確性和高順序性,而且排除了由重復序列和同聚物導致的測序錯誤。

在光學系統和制造工藝方面,HiSeq 2000在Genome Analyzer的基礎上進行了全面改進和提升。光學系統采用2個激光源對Flowcell進行掃描,并使用4臺照相機對4種堿基分別進行記錄,大幅度減少了不同堿基之間的信號干擾,提高了測序系統的準確度。同時,HiSeq 2000使用了新穎的雙表面成像技術,增加了Flowcell的有效面積,從而提高測序產量和降低成本。

測序原理

Hiseq 2000技術是基于DNA單分子簇的邊合成邊測序技術,和專有的可逆終止化學反應原理。測序時將基因組DNA的隨機片段附著到光學透明的玻璃表面(即Flow cell),這些DNA片段經過延伸和橋式擴增后,在Flow cell上形成了數以億計Cluster,每個Cluster是具有數千份相同模板DNA的單分子簇。然后利用帶熒光基團的四種特殊脫氧核糖核苷酸,通過可逆性終止的SBS(邊合成邊測序)技術對待測的模板DNA進行測序。這種新方法確保了高精確度和真實的一個堿基接一個堿基的測序,為同聚物和重復序列的測序提供了一個很好的解決方案。

應用范圍

基因組de novo測序,基因組重測序,轉錄組測序,小RNA測序,ChIP-Seq測序,甲基化測序等。


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